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Sujet de Thèse : Impact(s) d’une exposition à des ligands médicamenteux et environnementaux d’ERalpha36 sur l’initiation et/ou la progression des tumeurs mammaires
Dates : 2017/01/02 - 2019/12/31
Etudiant : Charlène THIEBAUT
Directeur(s) CRAN : Hélène DUMOND , Taha BOUKHOBZA
Description : Depuis une vingtaine d’années, l’exposition de la population générale à une variété et à des quantités croissantes de perturbateurs endocriniens oestrogéno-mimétiques d’origine anthropique est soupçonnée de promouvoir l’apparition de cancers hormono-sensibles comme les cancers du sein, de la prostate….
Dans le cadre de la thèse de Clémence Chamard-Jovenin, financée par l’ANSES et la région Lorraine, nous avons pu mettre en évidence qu’une exposition in utero de souris aux alkylphénols conduisait à l’apparition de lésions hyperplasiques de l’épithélium mammaire, précurseurs de transformation néoplasique. In vitro, en collaboration avec le LORIA, nous avons caractérisé plus finement et modéliser les mécanismes déclenchés par une exposition aux alkylphénols, dans un modèle de cellules épithéliales mammaires saines (MCF10-A) : l’altération du cycle cellulaire contribuant à stimuler la prolifération des cellules, la résistance à l’apoptose et les capacités migratoires accrues. Ces phénotypes dépendent en partie de l’activité d’un variant du récepteur alpha des œstrogènes, ERα36. Parallèlement, dans le cadre d’un projet INSERM/ ITMO Cancer, et en collaboration avec des équipes de Paris et Montpellier, nous identifions par un crible cellulaire des ligands environnementaux ou médicamenteux d’ERα36.
Nous souhaitons maintenant caractériser précisément l’interaction de quelques ligands pertinents avec ERα36, leur mode d’action dans les cellules épithéliales et cancéreuses mammaires, ainsi que l’impact d’une exposition fœtale à ces molécules sur le développement et le fonctionnement de la glande mammaire.
Pour cela, la doctorante poursuivra la collaboration initiée avec le Centre de biochimie structurale de Montpellier pour identifier les interactions ligands/récepteur. Afin de décrire le mode d’action de ces ligands, elle disposera in vitro de nombreuses lignées mammaires sur lesquelles le laboratoire travaille en routine : MCF10-A, MCF10-F, MCF-7, MDA-MB231, 235…. ainsi que des lignées stables MCF10-A qui surexpriment ou n’expriment plus ERα36. Une analyse cinétique exhaustive des expressions géniques et phénotypes sera réalisée après exposition à différentes doses de ligands dans ces lignées qui expriment ERα36 à des niveaux variables.
Nous développons actuellement un modèle de culture organotypique de glande mammaire de souris qui permettra de réaliser des traitements sur organe entier et ainsi d’appréhender les interactions en épithélium mammaire et stroma en limitant le nombre d’animaux utilisés.
In vivo, nous travaillerons sur un modèle unique de souris KI pour ERα36 dans la glande mammaire : le promoteur de ERα36 étant absent de l’intron 1 du gène ERα chez la souris, une lignée de souris Knock-In pour ERα36 dans la glande mammaire a été produite en collaboration avec l’Institut Clinique de la Souris (Illkirch) et est en cours de caractérisation.
L’étudiante effectuera les analyses phénotypiques, d’expression génique, d’histologie et d’immuno-histochimie qui porteront sur des marqueurs d’ontogenèse de la glande mammaire, de transformation néoplasique et de progression tumorale après exposition aux ligands choisis. En utilisant les résultats de ces analyses et en les enrichissant des recherches dans les bases de données ciblant les termes GO pertinents, l’étudiante remontera in-silico les chaînes de régulation impliquant des gènes d’intérêt. La quantification des différences entre les modèles de régulation obtenus servira de base pour la classification et l’évaluation de l’impact des différents ligands d’Erα36 dans les grandes fonctions impliquées dans le cancer : apoptose, prolifération, migration.
Des analyses QPCR ciblées seront ensuite menées pour confirmer et compléter les principaux résultats et prédictions obtenus in-silico.
Mots clés : cancer, développement, ERa36, souris KI, modelisation, analyse, perturbateur endocrinien
Conditions : (Thèse du 01/10/2016 au 30/09/2019)
Département(s) :
Santé - Biologie - Signal
Financement : ITMOCancer/ Ligue contre le Cancer/Demande de bourse MESR
Publications : doi: 10.1186/s12918-015-0178-7. doi: 10.1371/journal.pone.0061758. doi: 10.1016/j.mce.2011.11.021.    + CRAN - Publications